2.4 Primer Extension Assay

希望无论是10碱基对还是1000碱基对的产物，他们的标记量都相同，这就要用到一个不同的分析实验

这跟掺入法不同，这叫引物延伸实验，与掺入法不同的是，被标记的是底物，我们在引物中掺入荧光基团或放射性标记的核苷酸，这个引物从5’端到3‘羟基端和先前的引物都一样，因此合成了一个标记过的引物-模板接头

• Make A Labeled PTJ (label on primer)

  Perform Run Same Way

  标记通常必须位于引物上，因为合成完成后，引物就成为产物的一部分，而模板一旦分离，就不再属于产物了，反应完全是一样的

• Do Not Label dNTPs

  我们不标记dNTP，我们改变了标记方式，现在是在引物上，dNTP全是未被标记的

• Can’t Analyze By Filter Binding

  那么你运行反应，你不能用滤纸结合分析来检测

  如果反应中完全没有DNA聚合酶，会有什么结果？

  滤纸上会有大量放射性标记的DNA，如果你完成了整个产物的合成反应，也会得到大量产物，因为起始产物和终产物被标记的数量基本相同

• Can By Gel Separation

  能用凝胶分离法来检测，如果用溴化乙锭，结果看上去几乎和先前的结果是一样的，因为我们进行的就是相同的反应，但是如果用放射性同位素或者荧光法，会看到产物越来越长，但强度是一致的，因为无论是100碱基、1000碱基还是5000碱基，它们都连接着同样标记的引物，没有新的标记掺入